畜牧兽医学报

作者：荆婷婷, 尹号, 黄蓉, 兰仕梅, 李章程, 尤留超, 郝华芳, 付磊, 储岳峰

单位：中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州大学动物医学与生物安全学院, 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730000

关键词：牛支原体,原核表达,黏附作用,0580-C重组蛋白

基金：甘肃省科技重大专项（22ZD6NA001）；中国农业科学院创新工程所级重点项目（CAAS-ASTIP-JBGS-20210701）；中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费（110231160042012）；甘肃省重点人才项目（2021RCXM047）

旨在初步分析牛支原体（Mycoplasma bovis） PG45菌株0580基因的生物学功能。前期测试发现牛支原体PG45菌株、08M菌株、07801菌株都有溶解鼠红细胞的现象，根据NCBI中对PG45菌株的基因注释，筛选到1个假定与溶血素相关的基因MBOVPG45_0580。该基因编码的蛋白经预测具有4个跨膜区，全长表达困难，故构建了不含跨膜区的C端截短体原核表达载体Pcold III-0580-C，进行诱导表达以及纯化，并在小鼠中制备0580-C端重组蛋白的多克隆抗体，对0580-C重组蛋白溶红细胞能力、多克隆抗体效价及特异性、是否影响菌株黏附细胞的能力进行了探究。PG45菌株中假定的与溶血素相关的蛋白0580在牛支原体中的相似性高达100%，去除4个跨膜区的重组蛋白0580-C能在大肠杆菌中表达，相对分子质量约为37 ku；鼠红细胞溶血试验发现0580-C重组蛋白没有溶血活性，但黏附及黏附阻断试验发现该蛋白有助于提高牛支原体黏附EBL细胞的效率，0580-C蛋白鼠源多抗能有效阻断牛支原体对EBL细胞的黏附。制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体效价达211，且能识别到3株牛支原体菌株（PG45、08M、07801）天然表达的0580蛋白，表明制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体特异性较好。牛支原体中假定的与溶血素相关蛋白0580可能是一种新的黏附相关分子，为解析牛支原体MBOVPG45_0580基因的生物学功能以及牛支原体致病机制提供了新的见解。

来源：2023年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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