畜牧兽医学报

作者：高真贞, 蒙泽菁, 何小兵, 房永祥, 田慧慧, 陈国华, 景志忠

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室, 兰州 730046;2. 兰州大学公共卫生学院, 兰州 730000

关键词：A33,H3L,原核表达,多克隆抗体,中和活性

基金：中国农业科学院创新工程(CAAS-ASTIP-2019-LVRI-06)

正痘病毒属病毒的A33和H3L蛋白是其成员共有的中和抗体的两个主要靶标。为检测鼠痘病毒(ectromelia virus,ECTV)A33和H3L蛋白同源物的免疫原性及抗体中和活性,以ECTV-Moscow株基因组DNA为模板,PCR扩增A33和H3L同源基因EVM135、EVM085目的序列,分别构建pET30a-EVM135、pET30-EVM085原核表达载体,转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,利用镍层析柱纯化并进行逐步透析复性,免疫兔制备多克隆抗体。建立间接ELISA方法测定其抗体效价分别达1∶120 000和1∶360 000,Western blot和IFA证实该多克隆抗体具有良好的特异性和反应性;ECTV病毒中和试验表明抗EVM135多克隆抗体中和效价为1∶16,而抗EVM085多克隆抗体效价为1∶128。本研究通过高效表达EVM135和EVM085蛋白,并分析其免疫原性及抗体中和活性,为深入研究痘病毒致病和免疫机理,进而快速建立其诊断方法,为猴痘防控技术措施的研究奠定基础。

来源：2023年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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