畜牧兽医学报

作者：曹丽艳, 孔祥雨, 李想通, 索学鹏, 段月月, 袁聪, 施磊, 张宇, 马国祥, 郑海学, 王琦

单位：1. 中国农业科学院都市农业研究所, 成都 610213;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州 730046

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒,N蛋白,单克隆抗体,抗体序列分析

基金：四川省重大专项(重点研发,2022YFN0008);四川省杰青项目(21JCQN0175);中国农业科学院青年英才项目(王琦);中国农业科学院创新工程(ASTIP2022-34-IUA-07;ASTIP2023-34-IUA-07和CAAS-ASTIP-2022-LVRI)

猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)目前尚未有商品化诊断试剂盒,为填补行业空白,本研究制备了抗SADS-CoV核衣壳(N)蛋白单克隆抗体并对其序列进行了分析。利用原核表达系统表达SADS-CoV N蛋白并进行纯化,纯化的N蛋白作为免疫源免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得5株能够稳定分泌抗SADS-CoV N蛋白的杂交瘤细胞株,将其命名为1C10、4B10、6G1、6F3和6E8;此外,利用套式PCR扩增技术获得了抗体可变区基因序列。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,5株单抗特异性识别Huh7细胞感染的SADS-CoV。ELISA结果表明,5株单抗与纯化的SADS-CoV N蛋白具有良好的反应性,但是,与SADS-CoV反应性分析发现,只有6E8的反应性较好,其余四株均不反应。Western blot结果表明,5株单抗均能特异性识别纯化的以及SADS-CoV感染表达的N蛋白。亚类分型鉴定结果表明,1C10、4B10、6G1和6F3重链为IgG1型,6E8为IgG2a型,它们的轻链为Kappa型。截短表达分析表明,5株单抗识别N蛋白的区域为1-142 aa。总之,本研究制备的抗SADS-CoV N蛋白单克隆抗体为SADS-CoV新型诊断方法的开发以及SADS-CoV N蛋白功能及结构的研究提供了有用的工具。

来源：2023年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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