畜牧兽医学报

作者：张森豪, 王雪莹, 蔡李萌, 解伟纯, 匡虹迪, 王晓娜, 李佳璇, 崔文, 姜艳平, 周晗, 单智夫, 王丽, 乔薪瑗, 李一经, 唐丽杰

单位：1. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030;2. 农业部动物疫病病原生物学重点实验室 东北科学观测实验站, 哈尔滨 150030

关键词：猪流行性腹泻病毒,重组酶聚合酶扩增(RPA),侧流层析(LFD),快速诊断方法

基金：国家自然科学基金(U22A20527)

旨在建立一种针对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的敏感性高、特异性强的快速临床诊断方法。以猪流行性腹泻病毒cDNA为模板,在重组酶和聚合酶的共同作用下实现对目的基因的扩增,本研究设计了用于重组酶聚合酶扩增的引物,优化了重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)反应体系,检测了反应的特异性和敏感性,确定了反应的最佳温度和时间,通过结合琼脂糖凝胶电泳和侧流层析试纸条的方法进行分析和鉴定。试验结果显示反应的最佳温度和时间为30 ℃、20 min,反应可以检测到的最低质粒拷贝数为102 copies·μL-1,且在对猪的丁型冠状病毒、传染性胃肠炎病毒、轮状病毒和圆环病毒2型的检测中具有良好的特异性。综上所述,通过对RPA反应条件的摸索与优化,成功建立了猪流行性腹泻病毒重组酶聚合酶扩增结合琼脂糖凝胶电泳(Basic RPA)和侧流层析试纸条(LF-RPA)的检测方法,两种方法相比较于RT-PCR,有更短的检测时间且具有更高的敏感性,对仪器、场地和检测环境的要求更低,为今后PEDV的临床诊断及快速检测提供了更多的选择和更有效的技术支持。

来源：2023年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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