畜牧兽医学报

作者：邱英武, 常昊, 彭杰, 易和友, 王秋梅, 郭彦辰, 吴倩雯, 曹雪珍, 林丽苗, 李薇, 周庆丰, 张桂红, 李群辉, 龚浪

单位：1. 华南农业大学兽医学院非洲猪瘟防控技术研究中心, 广州 510642;2. 广东省畜禽健康养殖与环境控制企业 重点实验室, 新兴 527400;3. 国家非洲猪瘟区域实验室(广州), 广州 510642;4. 广东省动物源性人兽共患病 预防与控制重点实验室, 广州 510642;5. 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心, 茂名 525000

关键词：ASF,ASFV,TaqManFQ-PCR,分子诊断

基金：本研究受广州市重点领域研发计划(202206010036);广州市基础与应用基础研究项目(202201010490);茂名实验室科研启动项目(2021TDQD002);财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助(CARS-35)

本研究旨在建立一种特异、灵敏、快速的ASFV-G-ΔI177L实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法。针对ASFV I117L基因的保守区域设计特异性引物/探针对,通过优化反应条件和反应程序,从而提高检测方法的灵敏性,并验证检测方法的重复性和特异性。对170份临床样品进行了检测,并与OIE 推荐的检测方法进行对比。结果表明,基于ASFV I117L基因所设计的特异性引物/探针对,能扩增2.2×101~2.2×1010copies·μL-1的pMD18-I177L标准质粒,建立的标准曲线R2可达0.995 7,最低检测模板浓度为2.2×101copies·μL-1;该方法扩增反应采用一步法,耗时35 min,批内、批间变异系数均＜1.8%;针对ASFV I177L基因特异性扩增,但对其他5种常见猪病毒核酸样品及无酶水未见阳性扩增;用该方法对170份临床样品进行检测,本方法和OIE推荐的检测方法具有良好的一致性。本研究成功建立了一种特异、灵敏、快速ASFV-G-ΔI177L检测方法,为临床非洲猪瘟病毒的监测诊断提供了良好的技术支撑。

来源：2023年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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