畜牧兽医学报

作者：程天印, 吴聪颖, 刘雨珂, 段德勇

单位：湖南农业大学动物医学院, 长沙 410128

关键词：褐黄血蜱,HSP70-b2,定点突变,原核表达,抗凝活性,免疫原性

基金：国家自然科学基金青年项目(31902294);湖南省自然科学基金青年项目(2020JJ5230)

褐黄血蜱(Haemaphysalis flava, H.flava)热休克蛋白70-b2(heat shock protein 70-b2, HSP70-b2)属于HSP70家族。为评估褐黄血蜱HSP70-b2的抗凝血活性、免疫原性及其类14-Mer肽的作用,本研究通过RACE技术扩增褐黄血蜱HSP70-b2基因全长;定点突变其编码类14-Mer肽段基因序列获得HSP70-b2M基因全长;分别构建原核表达质粒,经原核表达、镍柱层析纯化获得可溶性重组蛋白,体外凝血四项试验评估rHSP70-b2与rHSP70-b2M的抗凝血活性;将重组蛋白与弗氏(不)完全佐剂按推荐剂量乳化,皮下免疫Sprague Dawley(SD)大鼠,间接ELISA检测血清抗体效价,探究rHSP70-b2与rHSP70-b2M的免疫原性。结果显示:HSP70-b2基因全长2 413 bp,开放阅读框长1 905 bp,编码蛋白中具有HSP70蛋白家族标签。成功将HSP70-b2中编码类14-Mer肽段的核酸序列突变为编码14-Mer肽段的核酸序列。与对照组相比,rHSP70-b2和rHSP70-b2M对凝血酶原时间(prothrombin time, PT)和活化部分凝血酶时间(activated partial thromboplastin time, APTT)无显著作用(P＞0.05),但均可延长凝血酶时间(thrombin time, TT)和纤维蛋白原(FIB)凝血时间(P＜0.05),且rHSP70-b2M与rHSP70-b2的抗血凝效果相近(P＞0.05)。在3次免疫后,大鼠血清中抗体效价随免疫次数的增加而提升,且rHSP70-b2诱导产生的抗体水平极显著高于rHSP70-b2M(P＜0.01)。综上表明:rHSP70-b2和rHSP70-b2M在体外可通过延长凝血酶时间和降低纤维蛋白原含量发挥抗凝血作用;rHSP70-b2和rHSP70-b2M均具有良好的免疫原性,可诱发体液免疫。

来源：2023年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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