畜牧兽医学报

作者：刘青, 吴少鹏, 石彬, 邵红霞, 钱琨, 叶建强, 秦爱建

单位：1. 扬州大学兽医学院 教育部禽类预防医学重点实验室, 扬州 225009;2. 扬州大学兽医学院 江苏省动物预防 医学重点实验室, 扬州 225009;3. 扬州大学兽医学院 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病防控协同控制中心, 扬州 225009;4. 扬州大学 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室, 扬州 225009

关键词：鸡CTLA-4,杆状病毒,单克隆抗体,生物学特性

基金：国家自然科学基金(31972717)

旨在制备鸡细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性单克隆抗体,为家禽免疫检查点和疫苗研发提供有益制剂。利用杆状病毒表达系统体外表达鸡的CTLA-4蛋白,以其为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,经B淋巴细胞融合技术制备、筛选出针对鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体。通过间接免疫荧光、蛋白免疫印迹、流式细胞术等方法分析抗CTLA-4单克隆抗体的生物学特性。结果显示:构建了在Sf9昆虫细胞中表达CTLA-4蛋白的重组杆状病毒,成功筛选出3株能稳定分泌抗鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体,分别命名为:mAb-CTLA4-3D7、mAb-CTLA4-5A4、mAb-CTLA4-6A12。亚类鉴定表明,mAb-CTLA4-3D7为IgG2a,Lambda链;mAb-CTLA4-5A4为IgG3,Kappa链;mAb-CTLA4-6A12为IgG2a,Kappa链。3株单克隆抗体均能与转染真核表达质粒pCAGGS-CTLA-4-Flag的DF-1细胞和感染重组杆状病毒rBac-CTLA-4的Sf9昆虫细胞反应。单克隆抗体mAb-CTLA4-3D7与鸡的PBMC有较好的结合活性,且能与CD3+T淋巴细胞结合,结合率约为16%。本研究首次成功制备了抗鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体,并分析了其反应活性及生物学特性,为免疫检查点在禽病的发病机制、信号通路、疫苗研发等研究领域提供了材料。

来源：2023年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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