畜牧兽医学报

作者：王丽, 郭雅茹, 张俊梅, 雷铭凯, 王振国, 张春香, 任有蛇

单位：山西农业大学动物科学学院, 太谷 030801

关键词：β防御素,1,25(OH)2D3,维生素D受体,基因敲除,附睾头上皮细胞

基金：山西省重点实验室开放课题基金(2022-06)

旨在研究1,25(OH)2D3是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L-1 1,25(OH)2D3处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)2D3处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)2D3能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P0.05)。综上所述,1,25(OH)2D3可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)2D3通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

来源：2023年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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