畜牧兽医学报

作者：周广青, 刘晓庆, 史喜绢, 杨大鹏, 袁莉刚, 常惠芸

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 兰州 730046

关键词：口蹄疫病毒,液相竞争ELISA,ELISA,抗体检测,链霉亲和素

基金：甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室建设项目(20JR10RA563)

旨在解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题,本研究在基于原有液相阻断ELISA的基础上进行方法优化,实现口蹄疫病毒抗体的快速、灵敏检测。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP-SA)相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法(SA-LPBE),在猪,牛、羊血清样品中具有较高的符合率。结合实际情况,判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128,猪血清效价≥64时,判定为阳性,与商用检测试剂盒结果一致。并且经符合率分析,与原试剂盒具有92.3%的符合率,其批内变异系数<5%,批间变异系数<10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线,根本上提高了酶促反应的效率,保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性;利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间由2 d缩短为3 h,解决了原有方法操作繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。建立的SA-LPBE可应用于FMDV抗体检测,为FMD流行和临床检测提供了技术方法。

来源：2023年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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