畜牧兽医学报

作者：王国超, 赵亚茹, 张忠辉, 张玉龙, 白鸽, 耿抒贤, 樊洁, 杨吉飞, 关贵全, 殷宏, 罗建勋, 牛庆丽

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 国家非洲猪瘟区域实验室 (兰州), 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 兰州 730046;2. 渭南市动物疫病预防控制中心, 渭南 715400;3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

关键词：非洲猪瘟病毒,pD205R蛋白,原核表达,多克隆抗体

基金：国家自然科学基金面上资助项目(32072830);国家重点研发计划(2021YFD1800101);甘肃省科技重大专项(20ZD7NA006;22ZD6NA001);农业科技创新工程 (ASTIP,CAAS-ASTIP-2016-LVRI);甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024);甘肃省自然科学基金(21JR7RA018);渭南市高层次人才"特支计划"项目(20210086)

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)pD205R蛋白参与病毒基因的转录,属于ASFV RNA聚合酶,且与真核生物RNA聚合酶II RPB5亚基相似,为深入了解pD205R结构,功能及病毒与宿主之间的作用机制。利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公布的不同毒株的ASFVD205R基因序列进行分析,利用ExPASy、GOR4、AlphaFold软件对该蛋白的理化性质及结构预测进行分析,并对其原核表达和制备抗pD205R蛋白多克隆抗体。结果显示:在不同基因型间D205R基因高度保守;利用ExPASy在线软件预测pD205R蛋白理化性质其分子式为C1088H1712N278O295S8,属亲水性蛋白,稳定性差;二级结构及三级结构预测显示,α螺旋是其主要结构形式,占比为35.12%;同时以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板,构建原核表达质粒pET-28a-D205R并转入Rosetta (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导重组蛋白成功表达,大小为23.3 ku。获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化,Western blot鉴定可与ASFV阳性血清发生特异性反应。免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体效价达到1∶51 200,Western blot和IFA结果显示制备的多克隆抗体够特异性的识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的天然pD205R蛋白,为进一步研究D205R基因的功能及其在宿主与病毒互作中的作用奠定了基础。

来源：2023年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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