畜牧兽医学报

作者：陈杨, 孟林春, 郭梦娇, 张成成, 薄宗义, 楚电峰, 曹永忠, 吴艳涛, 张小荣

单位：1. 扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病预防控制协同创新中心, 扬州 225009;2. 扬州大学农业科技发展研究院 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室, 扬州 225009;3. 青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室, 青岛 266114

关键词：鸡毒支原体,VlhA蛋白,抗体检测,间接ELISA

基金：财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助项目(CARS-40-K16);国家重点研发计划"科技助力经济2020"重点专项(SQ2020YFF0426460);动物基因工程疫苗国家重点实验室开放课题(AGVSKL-ZD-202003);江苏高校优势学科建设工程资助项目(2018年)

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)＋3.709,R2=0.917 6,S/P临界值为0.32,临界滴度是1 200。经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出 1∶2 000 稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示,本研究建立的rVlhA-ELISA方法和HI试验具有较好的临床应用价值,可以初步应用于MG感染的临床大规模、快速筛查并对结果进行复核。

来源：2023年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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