畜牧兽医学报

作者：翟云逸, 袁野, 李俊玫, 田路路, 刁梓洋, 李彬, 陈家露, 周栋, 靳亚平, 王爱华

单位：西北农林科技大学动物医学院 农业农村部动物生物技术重点实验室, 杨凌 712100

关键词：布鲁氏菌,外膜蛋白16,原核表达,单克隆抗体,竞争ELISA

基金："十三五"国家重点研发计划项目(2018YFD0500904)

旨在制备布鲁氏菌外膜蛋白16(OMP16)单克隆抗体,建立OMP16抗体竞争ELISA方法,为布病临床防控提供免疫血清学检测手段。本研究选取保守性高、免疫原性良好的布鲁氏菌OMP16,经原核表达获得携带GST或His标签的重组OMP16(rOMP16)。利用杂交瘤技术筛选可稳定分泌OMP16特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经亚型鉴定、细胞核型分析和抗体交叉反应性试验分析单抗性质。制备小鼠腹水并纯化,方阵滴定法建立布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法。结果表明,成功构建OMP16原核表达系统,经表达、纯化获得rGST-uOMP16和rHis-OMP16。筛选到1株遗传稳定的OMP16特异性杂交瘤细胞株,命名为B7;经鉴定,该抗体亚型为IgM-κ型,可识别目的蛋白,与标签蛋白无交叉反应。建立了布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法,该方法与试管凝集试验检测结果相比总体符合率为90.53%,显示出良好的一致性。本研究有望为布鲁氏菌病的临床防控提供特异性高、敏感性好的免疫血清学检测方法。

来源：2023年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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