畜牧兽医学报

作者：朱俊儒, 韦唯, 裴党帅, 张芬鹊, 段瑜, 郭永峰, 江悦, 夏树立, 韩静, 侯金星, 安小鹏

单位：1. 西北农林科技大学动物科技学院, 杨凌 712100;2. 渭南市动物疫病预防控制中心, 渭南 714000;3. 渭南市动物卫生工作站, 渭南 714000;4. 渭南市农产品质量安全检验检测中心, 渭南 714000;5. 渭南市农业技术推广中心, 渭南 714000;6. 黄骅市农业农村局, 黄骅 061100;7. 天津市农业科学院畜牧兽医研究所, 天津 300112;8. 杨凌职业技术学院, 杨凌 712100

关键词：PDCD4,miR-21-5p,奶山羊,凋亡,β-酪蛋白,TG

基金：陕西省重点研发计划（2021NY-001；2020ZDLNY02-01）；杨凌职业技术学院科学研究基金（A2017003）；杨凌职业技术学院自然科学研究基金（A2019067）；优质肉羊种质资源的引进、评价和利用（19ZXZYSN00010）

旨在探究奶山羊程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4，PDCD4）对乳腺上皮细胞（goat mammary epithelial cells，GMECs）凋亡及乳成分的调控作用。本研究通过双荧光素酶报告试验验证miR-21-5p与PDCD4的靶向关系，通过RT-qPCR、Western blot试验检测miR-21-5p对PDCD4的调控作用；将PDCD4干扰小RNA （si-PDCD4）与PDCD4过表达载体（pc3.1-PDCD4）转染进GMECs以探究PDCD4对GMECs的影响，通过EdU、CCK-8试验检测转染后对GMECs增殖的影响，利用流式细胞术检测转染后对GMECs凋亡的影响；利用ELISA试剂盒检测转染后GMECs中β-酪蛋白和甘油三酯（TG）的分泌情况；最后通过Western blot试验检测转染后GMECs中PI3K、mTOR、S6K、ERK、Bcl-2、Bax等蛋白的表达。双荧光素酶报告试验结果表明，PDCD4与miR-21-5p靶向结合；EdU、CCK-8及流式细胞术试验结果表明，过表达PDCD4后GMECs活力显著降低（P<0.01），即PDCD4抑制GMECs增殖并促进GMECs凋亡（P<0.01），干扰PDCD4的表达后GMECs活力显著提高（P<0.01），GMECs的凋亡水平显著降低（P<0.01）；ELISA试验结果表明，过表达PDCD4后GMECs中β-酪蛋白和TG的分泌量显著降低（P<0.01），降低PDCD4的表达后GMECs中β-酪蛋白和TG的分泌量显著上升（P<0.01）；Western blot试验结果表明，与对照组相比，过表达PDCD4后磷酸化的PI3K、mTOR、S6K、ERK蛋白表达显著降低（P<0.05），Bax蛋白表达被显著上调（P<0.01），Bcl-2蛋白表达水平被显著下调（P<0.01）；降低PDCD4的表达后，PI3K、mTOR、S6K、ERK的磷酸化蛋白表达显著提高（P<0.05），Bax的表达则显著下降（P<0.05），同时显著上调了Bcl-2的表达（P<0.05）。本研究结果表明，PDCD4通过激活ERK/Bcl-2/Bax信号通路促进奶山羊乳腺上皮细胞的凋亡，并通过抑制PI3K/mTOR/S6K信号通路降低奶山羊乳腺上皮细胞中β-酪蛋白和TG的分泌，miR-21-5p在GMECs中与PDCD4靶向结合并调控其表达。

来源：2023年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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