畜牧兽医学报

作者：但一昕, 杨璐, 向华, 张焕容, 任玉鹏, 杨发龙, 何翃闳, 朱江江

单位：1. 西南民族大学畜牧兽医学院, 成都 610041;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室, 成都 610041

关键词：山羊,BIRC5基因,过表达,干扰,细胞周期,细胞凋亡

基金：四川省自然科学基金项目（2022NSFSC0082）；西南民族大学优秀学生培养工程（2022NYXXS025）；动物遗传育种四川省重点实验室开放基金（202202）；四川省科技计划（2020JDJQ0010）；四川省畜禽育种攻关项目（2021YFYZ0003）；浙江省科技计划项目（2022C04017）

旨在在克隆山羊BIRC5基因的基础上，通过过表达或者敲低BIRC5基因表达揭示BIRC5基因对山羊睾丸细胞周期和凋亡的调控作用，为进一步完善BIRC5基因功能奠定基础。本研究以3只3日龄3 kg左右健康简州大耳羊公羊脾脏组织为模板，利用RT-PCR技术克隆山羊BIRC5基因CDS区序列，并进行生物信息学分析。将克隆回收产物连接真核表达载体，从而构建pcDNA3.1（+）-BIRC5。根据山羊BIRC5基因序列设计并筛选有效siRNA。将pcDNA3.1（+）-BIRC5和siRNA分别转染山羊睾丸细胞后，利用Western blot检测BIRC5蛋白表达，利用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡，利用实时荧光定量PCR技术检测对凋亡相关基因Bax、Caspase3、Caspase7、Bcl-2、p53、BCL2L11和PARP1的表达。结果，成功扩增山羊BIRC5基因序列，长度为506 bp，包含5'UTR 28 bp，CDS区429 bp，3'UTR 49 bp，编码142个氨基酸残基，且与牛亲缘关系最近。过表达BIRC5基因后抑制了细胞凋亡，且细胞被阻滞于G2/M+S期；同时可下调Caspase7、p53、BCL2L11、Bcl-2和Bax基因mRNA的表达，但Caspase3和PARP1 mRNA表达无显著变化。而敲低BIRC5基因表达后可显著促进细胞凋亡的发生，且细胞被阻滞于细胞被阻滞于G0/G1期，而Caspase3、Caspase7和PARP1 mRNA表达显著上升，p53和Bcl-2的表达显著下降，Bax和BCL2L11表达无显著变化。BIRC5基因可抑制山羊睾丸细胞的凋亡，并促进山羊睾丸细胞被阻滞于G2/M+S期。研究结果为进一步深入全面研究BIRC5基因的功能提供重要的试验数据。

来源：2023年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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