畜牧兽医学报

作者：李华玮, 王旭英, 乔宏兴, 李新锋, 姬向波, 郭科威, 杨中元

单位：1. 河南牧业经济学院畜产品质量安全技术研究院, 郑州 450046;2. 河南牧业经济学院动物医药学院, 郑州 450046;3. 河南牧业经济学院河南省非常规饲料资源创新利用重点实验室, 郑州 450046;4. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒,慢病毒载体,真核翻译起始因子5A,MARC-145细胞,感染

基金：国家自然科学基金(31902284)；河南省科技研发计划联合基金(应用攻关类)(222103810022)；河南省高等学校青年骨干教师培养计划项目(2020GGJS258)；河南牧业经济学院重点学科建设项目(XJXK202202)

本研究旨在通过慢病毒载体构建稳定表达真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A，eIF5A)的MARC-145细胞系并验证该细胞系对PRRSV感染的影响。全基因合成eIF5A序列，双酶切后构建慢病毒表达载体pLV-CMV-MCS-EF1a-Puro。将该载体和慢病毒包装质粒psPAX2与包膜蛋白质粒pMD2.G共转染HEK293T细胞，包装得到能表达eIF5A的慢病毒。将慢病毒转导至MARC-145细胞，经过嘌呤霉素筛选、细胞有限稀释法获得能稳定表达eIF5A的MARC-145细胞系。MTS试验证实构建的细胞系细胞活力无显著变化，病毒TCID50测定、实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和间接免疫荧光技术检测eIF5A稳定表达对PRRSV滴度、PRRSV N基因及N蛋白表达的影响，发现MARC-145-eIF5A细胞系能显著促进PRRSV的增殖。本研究成功构建了稳定表达eIF5A的细胞系MARC-145-eIF5A，PRRSV感染试验证实体外稳定表达eIF5A可以促进PRRSV在MARC-145细胞的增殖。

来源：2023年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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