畜牧兽医学报

作者：杨晓伟, 赵自亮, 付雨, 于子肖, 赵永聚

单位：1. 西南大学动物医学院, 重庆 402460;2. 西南大学动物科学技术学院, 重庆 400715;3. 草食动物科学重庆市重点实验室, 重庆 400715

关键词：TET1基因,uNK细胞,细胞增殖,细胞因子,小鼠

基金：国家自然科学基金(32002356)；重庆市自然科学基金(cstc2019jcyj-msxmX0140)；2021年国家级大学生创新创业项目(202110635014)；重庆市科企联合体种质资源收集利用与品种试验项目(草食牲畜)

本研究旨在了解去甲基化酶1(ten eleven translocation，TET1)对小鼠子宫内自然杀伤细胞(uterine natural killer, uNK)的增殖及其细胞因子分泌表达的影响。采集妊娠9~12 d小鼠子宫内膜，分离淋巴细胞，使用链霉亲和素磁珠法进一步分选uNK细胞进行培养；针对TET1基因合成RNA干扰序列，并将其连接入RNA干扰载体GM-19167，构建干扰表达质粒，包装成慢病毒(lentivirus)并进行病毒滴度的测定；按照慢病毒与细胞数(10～200)∶1的比例转染uNK细胞，168 h后荧光显微镜检测转染效果，收集uNK细胞，以β-actin为内参进行荧光定量PCR检测以验证TET1基因的干扰效果，利用Cell Counting Kit-8 (CCK8)对uNK细胞的增殖情况进行检测，分别合成γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor C，VEGF-C)和β1转化因子(transforming growth factor-β1，TGF-β1)3种细胞因子的检测引物，通过荧光定量PCR方法进行检测。结果发现，慢病毒感染168 h后uNK细胞中TET1的表达量显著下降(P0.05)；荧光定量PCR检测结果显示，细胞因子TGF-β1的表达水平显著上升(P<0.01)，而IFN-γ和VEGF-C两种细胞因子均显著下降(P<0.05)。下调TET1基因的表达不影响uNK细胞的正常增殖，但会影响其细胞因子的转录，进而对动物子宫内的天然免疫发挥重要作用。

来源：2023年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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