畜牧兽医学报

作者：张婷, 冯涛, 杨金柯, 郝雨, 杨行, 张大俊, 史喜绢, 闫文倩, 陈玲玲, 刘湘涛, 郑海学, 张克山

单位：中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室 国家口蹄疫参考实验室, 兰州 730046

关键词：非洲猪瘟病毒,条件性D1133L基因缺失,重组病毒,增殖特性

基金：国家重点研发计划（2021YFD1801300）；甘肃省重大专项（20ZD7NA006）；甘肃省科技重大专项（21ZD3NA001）；中国农业科学院重大任务（CAAS-ZDRW202006-03）

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒（ASFV）编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要，本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因，以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130，将重组转移载体转染骨髓源巨噬细胞（BMDMs），以ASFV CN/GS/2018为亲本毒株感染BMDM，在β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）存在的条件下，经绿色荧光和PCR鉴定，获得条件性敲除D1133L重组毒株vD1133Li。利用荧光显微镜观察该重组毒株与亲本毒株在猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中的复制差异，利用qPCR技术比较重组病毒与亲本毒株的复制差异，分析vD1133Li在无IPTG情况下回补D1133L蛋白后与在IPTG诱导情况下的复制差异。结果显示：本研究成功构建了条件性敲除D1133L的ASFV重组病毒vD1133Li，重组毒株不表达D1133L，在IPTG诱导下复制能力显著低于亲本毒株；在稳定表达D1133L的MA-104细胞系中，vD1133Li复制能力恢复。综上所述，D1133L基因对于ASFV复制至关重要，试验结果为进一步研究D1133L在ASFV致病中的机制及针对D1133L靶向药物研发提供了研究基础。

来源：2023年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2023年第2期