畜牧兽医学报

作者：翟刚, 顾文源, 刘涛, 刘莹, 张帅, 范京惠, 左玉柱

单位：1. 河北农业大学动物医学院, 保定 071001;2. 河北省兽医生物技术创新中心, 保定 071001;3. 河北省动物疫病预防控制中心, 石家庄 050000;4. 瑞普(保定)生物药业有限公司, 保定 071001

关键词：猪流行性腹泻病毒,qPCR,S基因,遗传变异分析

基金：河北省现代农业产业技术体系生猪创新团队（HBCT2018110207）

旨在建立一种能快速、高效且灵敏的检测出猪流行性腹泻病毒（PEDV）的通用型TaqMan qPCR检测方法，并进一步了解河北省PEDV的遗传变异情况。本研究参考PEDV变异株AJ1102的M基因的保守区域设计特异性引物及探针，对引物浓度、退火温度等条件进行优化，建立了一种应用于猪场筛查PEDV的qPCR方法，并对筛查出的阳性样品S基因扩增测序后进行遗传进化分析。结果显示：该方法的特异性强，与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）及传染型胃肠炎病毒（TGEV）等猪病常见病原均无交叉反应；建立的检测方法对pMD19T-PEDV标准品的最低检测下限为1.09×101拷贝·μL-1，比普通PCR灵敏约100倍，敏感性高；组内和组间的变异系数均小于1%，重复性良好。基于S全基因成功克隆出的9条序列分布于GⅡ的两个亚群，克隆的9条序列的核苷酸相似性为96.6%～99.1%；氨基酸的相似性为94.6%～98.7%。结果表明：本研究得到的PEDV流行株与近年来国内分离株的关系较为密切，而与中国目前使用的疫苗株以及欧洲株亲缘关系较远，这表明河北部分地区PEDV当前流行毒株比较复杂且有变异的趋势，提示持续检测PEDV流行毒株变异动态的必要性。本研究不仅为PEDV的临床诊断提供了技术支持，更为进一步掌握PEDV遗传进化规律提供了参考依据。

来源：2023年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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