畜牧兽医学报

作者：李舜, 李桂珍, 原耀贤, 李康健, 马春全, 李守军, 黄良宗, 马骏

单位：1. 佛山科学技术学院生命科学与工程学院, 佛山 528225;2. 广东科贸职业学院动物科技学院, 广州 510430;3. 华南农业大学兽医学院, 广州 510642;4. 佛科院附属动物医院, 佛山 528225

关键词：犬流感,H3N2,反向遗传操作系统,PA-X,致病性

基金：广东省重点领域研发计划项目(2019B020217002)；广东省教育厅高校科研项目(2017KTSCX193)；佛山市科技创新项目(2020001004909)

H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)已在中国多地的犬群中流行，是禽流感跨宿主感染并形成新分支的近期案例。研究表明，PA-X基因与甲型流感病毒适应新宿主的能力相关，且其长度能够影响甲型流感病毒的复制及致病能力。为了解PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV复制能力及致病力的影响，本研究利用H3N2 CIV的8质粒操作系统，拯救了三株重组H3N2 CIV毒株：PA-X基因表达大小为232个氨基酸多肽的亲本病毒CIV_PA-X_232；对PA编码区第191、192位氨基酸的密码子进行改造，PA-X基因不表达蛋白的重组病毒CIV_PA-X_Knock；对PA+1编码区第232位氨基酸进行突变，PA-X基因表达大小为252个氨基酸多肽的重组病毒CIV_PA-X_252。通过比较3株重组病毒的聚合酶活性，在MDCK细胞中的复制效率及对小鼠致病性的差异，来评价表达不同长度的PA-X基因对H3N2 CIV的影响。结果显示，CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_232，且CIV_PA-X_252的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_Knock；CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock在MDCK细胞中的复制能力显著(P<0.05)强于CIV_PA-X_232；小鼠攻毒试验结果显示，3株重组病毒对小鼠的体重变化无明显影响，且对小鼠无致死性；仅能在感染后第1天的小鼠肺中检测出3株重组病毒的TCID50，且病毒滴度无显著差异；3株重组病毒均能对小鼠肺造成病理损伤，其中，CIV_PA-X_252对小鼠的致病性最强，CIV_PA-X_232次之，CIV_PA-X_Knock对小鼠的致病性最弱。上述结果表明，PA-X基因的延长能够提高H3N2 CIV在MDCK细胞中复制能力和对小鼠肺造成病理损伤的能力，但该变化可能对H3N2 CIV在小鼠肺内的复制能力没有影响。本试验初步探究了PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV的影响，为后续H3N2 CIV致病机制的研究提供了初步的参考。

来源：2023年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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