畜牧兽医学报

作者：李亚军, 茹毅, 郝荣增, 蒋成辉, 王伟, 张越, 张贵才, 刘华南, 卢炳州, 杨洋, 陶世宇, 杨锐, 宋向东, 陈娇, 余四九, 郑海学

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室, 兰州 730046

关键词：牛病毒性腹泻病毒,E2蛋白,真核表达,CHO悬浮培养,免疫原性

基金：甘肃省科学技术厅-科技重大专项计划(21ZD3 NA001)；中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费(1610312021013)

旨在利用悬浮培养CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV) E2蛋白，并鉴定纯化E2蛋白的免疫原性。本研究以BVDV-1 NADL株基因序列为基础，构建BVDV E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2，转染经悬浮培养的CHO细胞进行分泌表达，收集细胞培养上清，进行亲和层析法纯化，SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达和纯化，Western blot鉴定与His抗体和BVDV阳性血清反应性，利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔，用细胞间接免疫荧光(IFA)和ELISA鉴定E2蛋白的反应活性。纯化E2蛋白经BCA蛋白定量试剂盒检测后表达量高达1.228 mg·mL-1；Western blot结果显示，利用His抗体和BVDV阳性血清均可检测到目的蛋白的特异性条带；新西兰大白兔一免后第7天利用间接ELISA可检测到血清抗体阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平达到1∶1 024 000；IFA试验结果显示，该血清抗体可检测到BVDV感染MDBK细胞中E2蛋白的表达，进一步证实纯化的E2蛋白具有良好的免疫原性和特异性。本研究成功利用CHO悬浮培养真核表达系统制备了纯化的BVDV E2蛋白，该蛋白具有良好的免疫原性，为BVDV的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。

来源：2022年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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