畜牧兽医学报

作者：陈达年, 马旭升, 代军飞, 汪洋, 李茜, 白衡, 毛甜甜, 刘永生, 丁龙, 陈昊翰, 陈思言, 饶宇飞, 贾宁, 张杰, 郑海学, 刘湘涛

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 兰州 730000;3. 河北科技师范学院动物科技学院 河北省预防兽医学重点实验室, 秦皇岛 066004;4. 深圳真瑞生物科技有限公司, 深圳 518000

关键词：ASFV,MGF360-13L,炎性因子,生长曲线测定

基金：国家自然科学基金(31941002)；甘肃省科技重大专项(20ZD7NA006-1)；中国农业科学院基本科研业务费(Y2021YJ10)

旨在初步探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)多基因家族MGF360-13L基因的功能。使用生物信息学软件对MGF360-13L基因进行分析；构建真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L并转染至293T细胞进行表达；利用同源重组方法构建基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L，以相同的感染复数(MOI=0.01)在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中感染基因缺失毒株和亲本毒株(ASFV CN/GS/2018)后，利用红细胞吸附试验(HAD)计算病毒滴度并绘制体外生长曲线；以MOI=1将ASFV-ΔMGF360-13L和ASFV CN/GS/2018分别感染猪骨髓巨噬细胞(BMDM)，利用qPCR和ELISA测定细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果表明，MGF360-13L基因在ASFV基因Ⅱ型中相对保守，编码蛋白属于非分泌型、无跨膜区、亲水性好；构建的真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L被293T细胞表达；成功获得MGF360-13L单基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L，与ASFV CN/GS/2018相比，其体外复制没有显著性差异；在ASFV-ΔMGF360-13L感染BMDM后，IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子在转录和分泌水平都显著高于ASFV CN/GS/2018。本研究成功制备了ASFV的MGF360-13L基因缺失毒株，并证实了MGF360-13L基因作为ASFV复制非必需基因具有抑制炎性因子表达的功能，这为进一步注释ASFV MGF360-13L基因功能提供了线索。

来源：2022年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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