畜牧兽医学报

作者：王家敏, 李自良, 马芳芳, 康碧静, 田玲, 李倬, 马忠仁, 乔自林

单位：1. 西北民族大学 生物医学研究中心 甘肃省动物细胞技术创新中心, 兰州 730030;2. 四川大学 生物治疗国家重点实验室, 成都 610041;3. 西北民族大学 生命科学与工程学院, 兰州 730030

关键词：BHK-21悬浮细胞,生物反应器,伪狂犬病病毒,敏感性

基金：西北民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目（31920210053）；教育部动物医学生物工程创新团队（IRT_17R88）

旨在筛选伪狂犬病病毒（PRV）敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性，优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件，建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法，以细胞生长动力学特性、TCID50病毒滴度等参数为指标，优化1.2 L生物反应器中BHK-21悬浮细胞的最佳培养和增殖病毒条件，在5 L生物反应器中进一步批培养验证。结果显示，筛选获得PRV高敏感的BHK-21-02贴壁细胞和BHK-21-XF02悬浮细胞各1株，BHK-21-XF02悬浮细胞在含3%血清的SLM-BHK低血清培养基和SFM-BHK无血清培养基中均能实现良好的生长和病毒增殖。利用响应面法优化得到1.2 L反应器最佳培养条件为接种密度1.20×106cells·mL-1、搅拌转速120 r·min-1、DO值40%，5 L反应器批培养72 h细胞密度可达（7.61±0.18）×106 cells·mL-1、细胞活率为（96.93±1.18）%。利用单因素法优化得到1.2 L反应器最佳病毒增殖条件为MOI 0.001、培养温度37℃、细胞密度2.0×106cells·mL-1、搅拌转速80 r·min-1，5 L反应器批培养接毒后48 h病毒滴度达到最大值（7.13±0.11） lgTCID50·mL-1。本研究可为PRV疫苗相关研究和规模化生产提供参考。

来源：2022年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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