畜牧兽医学报

作者：郭妍妍, 梁灿新, 李锦群, 董欣怡, 廖明, 曹伟胜

单位：华南农业大学兽医学院, 人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室, 农业部兽用疫苗创制重点实验室, 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室, 广州 510642

关键词：K亚群禽白血病病毒,地方品种鸡,分子流行病学,gag基因,感染性克隆

基金：广东省重点领域研发计划项目（2020B020222001）；广东省家禽产业技术体系（2022KJ128）；国家肉鸡产业技术体系（CARS-41-G10）

为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒（avian leukosis virus，ALV-K）的分子特征，于2020-2021年，从广东7家（A～G）正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8 042份。通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测p27抗原，共检出357份阳性，并对ELISA结果S/P值0.2～0.6的150份阳性样品进行PCR鉴定和env基因测序，共分离到32株ALV-K，进一步选取16株进行全基因组扩增及测序分析。结果显示，这16株ALV-K全长为7 481～7 496 bp，基因组符合5'-LTR-UTR-gag-pol-env-UTR-LTR-3'典型的反转录病毒结构，不含已知致癌基因；其gp85基因与ALV-K参考株位于同一进化分支上且相似性最高（>94.0％）；其pol、gp37基因均比较保守，与ALV各亚群相似性均较高（>94.0％）；其LTR与内源性ALV及大多数ALV-K参考株相似性最高（91.4％～99.5％），且LTR U3区与内源性ALV LTR有相同的转录调控元件；此外，观察到31.3％（5/16）的分离株在gag基因373-384位核苷酸存在12 bp的缺失，进一步以缺失株GD20 JM10为亲本，通过PCR分段扩增和同源重组的方法分别构建了缺失株（rGD20 JM10）和回补株（rGD20 JM10 A12）的cDNA克隆，将其转染DF-1细胞，ELISA和IFA结果表明，病毒拯救成功；体外复制动力学结果显示，两者差异不显著（P>0.05）。本研究所调查的广东7个种禽场的ALV-K流行株均携带内源性LTR，且分子特征较为稳定，故采用更敏感的检测技术在开展ALV净化时尤为重要，此外，gag基因373—384位核苷酸的规律性缺失对病毒的体外复制能力无显著影响。

来源：2022年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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