畜牧兽医学报

作者：陈琪, 杜长征, 郑雪迪, 马伯利, 徐金瑞, 杨易

单位：1. 宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室, 银川 750021;2. 宁夏大学生命科学学院, 银川 750021

关键词：Wnt5a,BCG,牛肺泡上皮细胞,细胞自噬

基金：国家自然科学基金（31960712；31960700）

旨在探讨体外分离培养牛肺泡上皮细胞（bovine alveolar epithelial cells，BAECs）的方法及Wnt5a对牛结核分枝杆菌卡介苗（bacille Calmette-Guérin，BCG）感染BAECs细胞自噬的调控机制。试验选用酶联合消化法和机械刮刷法分离细胞，差速贴壁法纯化BAECs，免疫荧光染色检测上皮细胞标志物角蛋白14（cytokeratin 14，CK14）和角蛋白5（cytokeratin 5，CK5）的表达；BCG感染BAECs，并用Box-5抑制Wnt5a的表达，Western blot和免疫荧光染色检测自噬相关蛋白及非经典Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果表明，采用酶联合消化法和机械刮刷法能够成功分离纯度较高的BAECs，细胞经CK14和CK5鉴定为阳性；BCG感染BAECs促进Wnt5a表达，增加细胞自噬，Box-5预处理下调BCG诱导的细胞自噬相关蛋白LC3II、P62、Atg7及Atg5的表达，且抑制非经典Wnt/Ca2+信号通路相关蛋白Wnt5a、CaMKII及NFAT的表达。综上，试验成功建立BAECs分离培养方法，BCG感染增加BAECs内Wnt5a表达和细胞自噬，抑制Wnt5a下调BCG诱导的BAECs细胞自噬，且Wnt5a是通过非经典Wnt/Ca2+信号通路调控BCG诱导的BAECs细胞自噬。

来源：2022年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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