畜牧兽医学报

作者：贾含笑, 袁红根, 李振, 关帅印, 张金花, 宋云峰

单位：华中农业大学动物医学院, 武汉 430070

关键词：PCV2,复制起始区,细胞互作蛋白,PARP1,DNA损伤修复

基金：国家自然科学基金项目（31972658）

旨在筛选PK-15细胞中与猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）复制起始区（origin of replication，Ori）互作的细胞蛋白谱，并初步探究PARP1蛋白对PCV2复制的调控。利用DNA-protein pull down结合LC-MS/MS方法筛选PCV2复制起始区DNA互作蛋白；对互作蛋白进行GO分析以及KEGG通路富集分析，并绘制蛋白互作网络图。在对互作蛋白进行分析的基础上，选择聚（ADP-核糖）聚合酶1（PARP1）蛋白，开展了深入研究。构建了PARP1蛋白以及PCV2复制蛋白Rep真核表达质粒，并利用DNA-protein pull down及DNA IP试验验证PARP1蛋白与PCV2 Ori的互作；通过Co-IP试验，研究了PARP1蛋白与PCV2 Rep蛋白的互作；在细胞中过表达或沉默PARP1蛋白，通过qPCR方法检测对PCV2复制的影响。本研究共鉴定到130种可能与Ori互作的宿主蛋白，其中，与DNA功能相关的蛋白共有45种，主要涉及宿主DNA损伤修复及DNA复制功能；验证了PARP1蛋白与PCV2基因组Ori以及Rep蛋白互作。用siRNA沉默PARP1蛋白表达后，PCV2基因组复制效率显著下降，瞬时过表达PARP1蛋白，PCV2基因组复制效率显著提高。综上所述，本研究筛选到130种可能与PCV2 Ori互作的细胞蛋白，发现PARP1蛋白可结合PCV2基因组Ori及Rep蛋白并促进PCV2的复制，为PCV2药物靶点选择及PCV2复制起始过程研究奠定了基础。

来源：2022年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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