畜牧兽医学报

作者：魏甲园, 邾倩, 杨亚星, 申明

单位：南京农业大学动物科技学院, 南京 210095

关键词：氯化钴,化学缺氧,猪卵泡颗粒细胞,细胞增殖,DNA氧化损伤

基金：江苏省大学生创新训练计划项目（202110307117Y）；国家自然科学基金面上项目（31972564）

旨在探究氯化钴（CoCl2）诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料，使用化学性低氧模型诱导剂CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl2最适处理浓度，用200 μmol·L-1 CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞12 h，将培养出的传代细胞分成4组处理，分别为：对照组、CoCl2诱导缺氧处理组、GSH处理组、GSH+CoCl2联合处理组。对照组为完全培养基培养12 h，CoCl2诱导缺氧处理组给予终浓度200 μmol·L-1 CoCl2的培养基培养12 h，单独GSH处理组加入浓度为2 mmol·L-1的GSH处理12 h，GSH+CoCl2联合处理组加入200 μmol·L-1 CoCl2和2 mmol·L-1的GSH联合处理细胞后培养12 h。12 h后检测各组细胞增殖活性、ROS水平、γH2AX蛋白活性水平和Oxo-8-G水平。采用CCK-8法检测其增殖活性；采用双氯荧光素（2’，7’-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA）检测ROS水平；Western blot检测γH2AX蛋白活性水平，采用FITC荧光小鼠单克隆抗体检测Oxo-8-G水平。为了进一步明确CoCl2诱导的颗粒细胞增殖阻滞与DNA氧化损伤的关系，本试验在CoCl2处理的基础上添加抗氧化物GSH处理12 h后检测细胞增殖、ROS水平、DNA氧化损伤等相关指标。与对照组相比，200 μmol·L-1 CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞后，细胞增殖活力极显著降低（P<0.000 1），缺氧组ROS水平极显著升高（P<0.000 1），γH2AX蛋白表达极显著升高（P<0.000 1），Oxo-8-G水平极显著升高（P<0.000 1）。与缺氧组相比，在CoCl2处理基础上添加GSH后，ROS、Oxo-8-G、γH2AX水平极显著降低（P<0.000 1），并伴随细胞增殖活性的显著恢复（P<0.000 1）。CoCl2可抑制猪卵泡颗粒细胞增殖活性，机制与诱导DNA氧化应激损伤有关。

来源：2022年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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