畜牧兽医学报

作者：刘倩, 李大鹏, 张宏, 刘琴, 王学智, 李建喜, 杨孝朴, 张景艳

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所, 兰州 730050;3. 河北农业大学中兽医学院, 保定 071001;4. 甘肃省兽药饲料监察所, 兰州 730000

关键词：黄芪多糖,鸡巨噬细胞,炎症因子,TLRs,免疫调节

基金：国家自然科学基金项目（31602101）；兰州市人才创新创业项目（2020-RC-147）；国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项（2017YFE0114400）

黄芪多糖（APS）调节天然免疫的作用已被广为认知，但有关APS对鸡巨噬细胞（HD11）调节作用及其分子机制的研究报道鲜少。本试验以脂多糖（LPS）诱导损伤的HD11细胞为研究模型，旨在评价APS对HD11抵御LPS刺激损伤的保护作用及对信号通路中敏感TLRs mRNA转录水平的影响。采用CCK-8法确定LPS诱导细胞炎症损伤模型的最适浓度和APS最适工作浓度；结合显微观察、一氧化氮（NO）检测和乳酸脱氢酶（LDH）检测评价APS对LPS诱导损伤HD11细胞的干预作用；采用实时荧光定量PCR （RT-PCR）方法检测APS对LPS诱导损伤HD11细胞的炎性细胞因子及TLR1、TLR2、TLR4、TLR15 mRNA表达的调节作用。结果表明：当LPS浓度>9.76 μg·mL-1时，在2%鸡血清+1%双抗的完全培养液中培养的HD11细胞的增殖活力显著下降，且细胞的炎症损伤变化明显。当APS浓度>50 μg·mL-1时，HD11细胞增殖活性持续上升，其添加剂量与细胞增殖活性呈正相关性。100 μg·mL-1 APS能显著提高HD11细胞中NO、LDH的释放（P<0.05），但极显著（P<0.01）、显著（P<0.05）降低9.76 μg·mL-1 LPS诱导损伤HD11细胞中NO、LDH的释放；其能显著提高HD11细胞促炎因子（IL-1β、TNF-α及iNOS） mRNA水平（P<0.05），极显著抑制IL-10 mRNA水平（P<0.01），但能极显著抑制LPS损伤HD11细胞中IFN-α、TNF-α、IL-10 mRNA水平的升高（P<0.01），显著降低LPS诱导损伤HD11细胞中IL-6、IL-1β、iNOS mRNA的升高（P<0.05）。100 μg·mL-1 APS能极显著降低HD11细胞TLR2、TLR4及TLR15 mRNA转录水平（P<0.01），极显著抑制LPS诱导损伤HD11细胞TLR2 mRNA转录水平升高（P<0.01），可极显著（P<0.01）、显著（P<0.05）降低LPS诱导损伤HD11细胞TLR4、TLR15 mRNA转录水平，但对HD11细胞和LPS诱导损伤HD11细胞TLR1 mRNA转录水平均无明显作用。综上可知，APS对HD11细胞的安全浓度范围大，可通过调节TLR2、TLR4及TLR15 mRNA水平，降低LPS诱导损伤HD11细胞过度炎症反应，发挥免疫双向调节作用。

来源：2022年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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