畜牧兽医学报

作者：陈孝军, 马俊, 陈熊男, 梁祎凡, 高琦, 黄钊, 许润达, 郑佳琛, 郑泽中, 张桂红, 王衡, 龚浪

单位：1. 华南农业大学非洲猪瘟防控技术研究中心, 广州 510642;2. 国家非洲猪瘟区域实验室(广州), 广州 510642;3. 华南农业大学兽医学院广东省临床重大疾病综合防控重点实验室, 广州 510642;4. 华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心, 广州 510642

关键词：非洲猪瘟病毒,p30蛋白,单克隆抗体,生物淘选,抗原表位

基金：广东省重点领域研发计划资助(2019B020211003)；茂名实验室科研启动项目(2021TDQD002)国家自然科学基金专项项目(31941004)；财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系

旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV) p30蛋白的B细胞抗原表位，本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb)，并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先，通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白，将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备，通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞，并以细胞表达的方法制备单克隆抗体；采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定。利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测，根据预测结果对CP204L基因进行截短表达，利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定。最后，利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选，筛选多肽表位，并与上述基因截短表达筛选方法进行比对。特异性鉴定结果显示，该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV；基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为84M～K142；噬菌体淘选试验结果表明,116TSSFETLFE124为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列，该结果进一步缩小了表位分布范围。本研究制备了p30蛋白的1株单克隆抗体，并对其抗原表位进行鉴定，为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础。

来源：2022年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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