畜牧兽医学报

作者：曾金红, 徐青元, 沙玮萍, 吴爽, 李媛, 辛九庆, 王秀梅

单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室, 哈尔滨 150069

关键词：丝状支原体丝状亚种,M0071蛋白,单克隆抗体,间接免疫荧光检测

基金：国家重点研发计划：动物疫病口岸检疫与风险防范技术研发及应用(2021YFD1800503)

旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb)，为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列，选取M0071蛋白作为研究对象。将原核表达的可溶性重组蛋白M0071(rM0071)作为免疫原免疫BALB/c小鼠，通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化，利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定，同时测定其抗体效价和抗体亚类。随后利用间接免疫荧光试验(IFA)评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力。结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1，将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1。特异性结果表明，MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应，而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应。抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链。经间接ELISA测定其抗体效价为1∶256 000。IFA试验结果表明，MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应，而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应，特异性良好。本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性，可作为CBPP病原免疫学诊断的工具，为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料。

来源：2022年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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