畜牧兽医学报

作者：杨洪早, 朱杰, 郭宏元, 汤傲星, 陈少宇, 刘春草, 张达, 袁莉刚, 刘光清

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院上海兽医研究所, 上海 200241

关键词：C11orf96,基因克隆,多克隆抗体,亚细胞定位

基金：国家自然科学基金项目(32000109)；上海市扬帆计划项目(20YF1457700)

本研究旨在通过克隆猫源C11orf96(Felis catus C11orf96,fC11orf96)基因，并制备其多克隆抗体分析该基因在细胞中的定位。以猫肾细胞cDNA为模板克隆fC11orf96基因，并利用无缝重组连接成功构建重组质粒pET-32a (+)-fC11orf96-Fe。随后将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导后成功表达fC11orf96-Fe重组蛋白，并利用该重组蛋白制备多克隆抗体。最后利用Western blot及间接免疫荧光试验分析多克隆抗体的有效性及其细胞定位。结果表明，成功获得猫C11orf96基因CDS序列，全长372 bp，可编码124个氨基酸，表达的fC11orf96-Fe蛋白主要以包涵体形式存在，蛋白大小约49 ku。由该重组蛋白制备的多克隆抗体能够识别细胞内源性fC11orf96蛋白和外源真核表达蛋白，并且发现fC11orf96蛋白定位于细胞质。本研究成功克隆得到猫C11orf96基因，并且fC11orf96蛋白定位于细胞质，为后续研究C11orf96的生物学功能奠定了基础。

来源：2022年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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