畜牧兽医学报

作者：王雪梅, 翟哲, 陈巧玲, 吴艳茹, 吴昊天, 黄惠娴, 刘志勇, 李崇瑞, 满初日嘎, 王凤阳, 杜丽, 陈思

单位：海南大学动物科技学院 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 海口市动物基因工程重点实验室，海口 570228

关键词：海南黑山羊,MBL2基因,转录调控,双荧光素酶,核心启动子

基金：海南省自然科学基金项目(2019RC123)；国家现代农业产业技术体系项目(财政部和农业农村部-CARS38)；海南省院士创新平台科研专项(YSPTZX202153)；海南省院士团队创新平台资金项目

甘露聚糖结合凝集素C(mannose binding lectin C，MBL-C)是C型(Ca2+依赖型)凝集素超家族的成员，其作为一种急性期蛋白，具有抗细菌感染的功能，参与机体的天然免疫反应。为鉴定出结合在MBL2基因启动子区(1 009 bp)的重要转录因子，探寻该基因的转录调控机制，本研究选取海南黑山羊MBL2基因的启动子序列1 009 bp，采用DNA重组技术克隆6个转录起始位点上游1 009 bp的启动子5'端侧翼缺失序列，克隆片段经双酶切后连接至pGL3-Basic载体。重组质粒转染至293T细胞中，结合双荧光素酶活性检测系统筛选MBL2基因的核心启动子区域。通过在线生物信息学软件预测山羊MBL2基因的核心启动子区域的转录因子结合位点，利用点突变技术构建转录因子结合位点缺失的载体，转染293T细胞后结合双荧光素酶活性检测系统分析其转录活性。结果表明，海南黑山羊MBL2基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-304~-45 bp范围内，在线软件分析该区域存在RELA、NF-κB2、MZF1等3种转录因子结合位点。双荧光素酶报告分析结果表明，RELA和NF-κB2的结合位点缺失后均使山羊MBL2基因的转录活性极显著下降(P < 0.01)。结果提示，RELA和NF-κB2对山羊MBL2基因的转录活性可能具有重要的正调控作用。该研究为进一步探寻海南黑山羊MBL2基因的功能提供理论依据。

来源：2022年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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