畜牧兽医学报

作者：史慧君, 董文丽, 郭妍婷, 袁圆圆, 陈俊贞, 杨莉, 冉多良, 付强

单位：新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052

关键词：信号肽酶复合体亚基1,牛病毒性腹泻病毒,5'非翻译区,双链RNA,复制

基金：国家自然科学基金项目(31902271;32160829)；自治区天山创新团队(2020D14005)；自治区百名博士引进计划

旨在探明信号肽酶复合体亚基1(signal peptidase complex subunit 1，SPCS1)影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)复制的作用。使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向SPCS1基因的sgRNA，克隆至慢病毒载体lentiCRISPR v2，连同包装质粒pSPAX2和pMD2.G转染至人胚肾细胞HEK-293T中，包装慢病毒并感染MDBK细胞，用嘌呤霉素筛选5代后获得敲低SPCS1蛋白后稳定表达的细胞，用Western blot检测SPCS1蛋白表达的情况；使用荧光定量PCR和免疫荧光分析检测BVDV感染SPCS1蛋白敲低细胞不同时间后5'非翻译区(untranslated region，UTR)mRNA的水平和双链RNA(double-stranded，dsRNA)积累，利用倒置显微镜观察BVDV致细胞病变(cytopathic effect，CPE)情况，根据Reed-Muench方法测定病毒滴度变化情况。结果：Western blot检测SPCS1蛋白表达量明显下降，成功构建SPCS1敲低(knockdown，KD)细胞；BVDV感染SPCS1 KD细胞后与对照Scramble相比，BVDV 5' UTR mRNA水平和dsRNA量均显著性降低(P < 0.01)，CPE现象推迟并减弱，子代病毒滴度显著性下降(P < 0.01)，最高降低95.8%。SPCS1敲低后显著性影响BVDV复制，为BVDV防控新技术的建立提供理论依据。

来源：2022年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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