畜牧兽医学报

作者：杨莎, 杨宇泽, 徐茜, 郝海生, 杜卫华, 庞云渭, 赵善江, 邹惠影, 朱化彬, 赵学明

单位：1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193;2. 北京市畜牧总站，北京 100101

关键词：dCas9-SunTag-DNMT3A,玻璃化冷冻,牛,IGF2R

基金：北京市自然科学基金面上项目(6202027)；国家自然科学基金面上项目(31972568)；河北省农业科技成果转化资金项目(21626604D)；河北省重点研发计划项目(21326608D)；国家家养动物种质资源库；中国农业科学院“科研英才培育工程”；中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS06)

旨在探究dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统对玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平及胚胎发育能力的影响，为冷冻卵母细胞/胚胎特定位点DNA甲基化的精确调控奠定基础。本研究将经过体外成熟的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻，随后进行体外受精，将受精所得到的原核胚进行dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统的注射，统计并计算卵母细胞的发育情况；通过亚硫酸盐测序的方式检测IGF2R基因启动子的甲基化水平，并利用荧光定量PCR检测IGF2R及相关基因的表达水平。与冷冻组相比，注射不同浓度的dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统后，只有40 ng·μL-1组显著地提高了玻璃化冷冻卵母细胞IVF后的发育能力(P＜0.05)，20和60 ng·μL-1组间差异不显著(P＞0.05)，但40 ng·μL-1组发育效果仍然显著低于新鲜对照组(P＜0.05)；对检测冷冻组、新鲜组、40 ng·μL-1组IGF2R基因启动子甲基化水平分析发现，40 ng·μL-1组水平与新鲜组相似，显著高于冷冻组(P＜0.05)；荧光定量试验结果显示，40 ng·μL-1组IGF2R基因mRNA表达水平相较于冷冻组显著降低(P＜0.05)，与新鲜组相似。注射40 ng·μL-1的dCas9-SunTag-DNMT3A甲基化编辑系统能够通过有效升高IGF2R基因启动子甲基化水平(P＜0.05)及显著降低其mRNA表达水平(P＜0.05)，来正向调节玻璃化冷冻卵母细胞IVF胚胎的发育情况，提高胚胎发育能力，使得其卵裂率和囊胚率都得到显著提高(P＜0.05)，同时促进胚胎发育相关基因的表达。

来源：2022年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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