畜牧兽医学报

作者：李厚伟, 王蕾, 张先锋, 胡慧, 张真真, 张云飞, 刘林涛, 姬星宇, 胡永浩

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070;2. 商丘美兰生物工程有限公司，柘城 476200;3. 河南农业大学动物医学院，郑州 450046

关键词：LLC-PK1细胞,悬浮培养,猪丁型冠状病毒

基金：国家自然科学基金面上项目(31772773；31972678)；河南省重大科技专项(181100110500)

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性，为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺；利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株；利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性；分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化，确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa，且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞；PDCoV按MOI为10-3接种于密度为2×106 cells·mL-1的LLC-PK1Sa细胞，当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL-1时，接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖，并对悬浮培养条件进行了初步优化，可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。

来源：2022年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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