畜牧兽医学报

作者：吴学敏, 陈如敬, 陈秋勇, 车勇良, 严山, 刘玉涛, 周伦江, 王隆柏

单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州 350013

关键词：伪狂犬病病毒,gC蛋白,酶联免疫吸附试验

基金：福建省自然科学基金项目(2020 J01350)；福建省自然科学基金项目(2020 J01347)；福建省科技重大专项(2019 NZ09007)；福建省公益类项目(2019R1026-5)；福建省自然基金项目(2019 J02014)

本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法，掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体，转染至Arctic express(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证，通过矩阵法试验、临界值的确定、特异性试验、重复性和敏感性试验，建立PRV-gC抗体间接ELISA检测方法，并对源于不同猪场的280份血清进行PRV-gC抗体检测。结果表明，成功表达获得FJ-2012株pCzn1-gC重组蛋白；建立的间接ELISA方法的最佳抗原包被浓度为10 μg·mL-1和最佳样品血清稀释比例为1∶50，阴性和阳性判定的OD650 nm临界值为0.406~0.438，介于之间的判定为可疑；临床检测结果显示，120份盲样猪血清PRV-gC抗体阳性率为91.67%、PRV-gB抗体阳性率为95.00%，两种抗体检测结果的整体符合率为95.83%；PR不稳定的猪场血样PRV-gC抗体阳性率为96.25%(77/80)，而PRV已净化的种猪场血样PRV-gC抗体阳性率为78.75%(63/80)。因此，建立的PRV变异株gC抗体间接ELISA检测方法为临床猪血清抗体检测提供了特异、灵敏和稳定的技术，也为开展变异PRV血清学调查奠定基础。

来源：2022年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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