畜牧兽医学报

作者：于学祥, 陈晓雨, 李栋凡, 孙琪, 库旭钢, 范盛先, 杨汉春, 何启盖

单位：1. 华中农业大学动物医学院, 武汉 430070;2. 农业微生物学国家重点实验室, 武汉 430070;3. 生猪健康养殖协同创新中心, 武汉 430070;4. 中国农业大学动物医学院, 北京 100193

关键词：非洲猪瘟,CP204L基因,p30蛋白,原核表达,ELISA抗体检测

基金：国家自然科学基金应急专项(31941004)；湖北省技术创新专项(2019ABA089)

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病，临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征，高发病率和高死亡率。为建立临床检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法，本研究扩增了ASFV-CP204L基因，通过pET-30a原核表达系统表达p30蛋白，使用Ni-NTA纯化表达产物，通过肠激酶切除外源性蛋白，得到无His-组氨酸标签的p30蛋白，以此为诊断抗原，建立间接ELISA方法。结果显示：表达的无标签p30重组蛋白大小约为30 ku，与ASF阳性猪血清具有较好的反应原性；确定ELISA抗原包被浓度为1 μg·mL-1，根据ROC曲线下面积确定S/P值>0.398判定为阳性，批内、批间变异系数均<10%；与PCV2、CSFV、PRV-gE、PRRSV阳性血清无交叉反应与INGENASA商品化试剂盒总符合率为97.78%。用该方法分别检测标准阳性血清、动物感染试验血清和收集的区域性临床血清644份，该方法最低可检测到1∶512倍稀释的标准阳性血清样品；检测感染动物血清，其中80%(4/5)的试验动物在第10天抗体为阳性。644份临床猪血清样品中抗体阳性率为7.61%，其中，母猪、后备母猪、仔猪、保育猪和育肥猪抗体阳性率分别为3.03%、0%、4.94%、7.55%和28.7%。本试验建立的ASFV-p30间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性，可应用于ASFV的抗体检测，为ASF的诊断和流行病学调查提供了技术手段。

来源：2022年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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