畜牧兽医学报

作者：叶状, 王乐乐, 汪飞燕, 刘悦, 彭月梅, 宿世杰, 候照峰, 许金俊, 陶建平, 刘丹丹

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 扬州大学 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

关键词：毒害艾美耳球虫,EnOXIO1,克隆表达,免疫荧光定位,功能鉴定

基金：国家自然科学基金(31972698；31602039)；江苏省高等学校自然科学研究面上项目(19KJD230004)；江苏高校优势学科建设工程项目

旨在探析毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的功能。提取毒害艾美耳球虫扬州株配子体总RNA，应用RT-PCR获取EnOXIO1编码基因，构建原核表达载体pET-28a(+)-EnOXIO1，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，体外诱导表达，对重组蛋白进行抗原性分析，应用制备的多抗进行激光共聚焦免疫荧光定位。结果显示，获得的EnOXIO1基因全长为2 535 bp，体外重组表达的蛋白大小约100 ku，主要以包涵体的形式存在，表达量约为0.5 mg·mL-1。Western blot分析结果显示，该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体识别，同时能被制备的鼠多抗以及毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别，表明该重组蛋白具有较好的反应原性和交叉反应原性。激光共聚焦免疫荧光定位结果显示，EnOXIO1基因表达产物主要存在于配子体内的成壁体上，参与了卵囊壁的形成。本研究成功克隆和表达了毒害艾美耳球虫EnOXIO1蛋白，并将其定位于配子体和卵囊壁上，为进一步解析EnOXIO1蛋白参与卵囊壁形成的分子机制奠定基础，为研制新型免疫阻断型球虫亚单位疫苗提供重要靶抗原。

来源：2022年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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