畜牧兽医学报

作者：赵玉佳, 陈汭, 宋代丽, 张路文, 肖黛, 李施倩, 文翼平, 伍锐, 赵勤, 杜森焱, 颜其贵, 文心田, 曹三杰, 黄小波

单位：1. 四川农业大学动物医学院猪病研究中心, 成都 611130;2. 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站, 成都 611130;3. 四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心, 成都 611130

关键词：猪丁型冠状病毒,氨基肽酶N,HEK293细胞,复制

基金：国家自然科学基金项目(32172888)；四川省国际科技创新合作项目(2021YFH0153)；云南省重大科技专项计划(202102AE090039)

以HEK293细胞为模型，探讨人氨基肽酶 N(human aminopeptidase N，hAPN)在猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)入侵人源细胞中的作用。RT-qPCR/RT-PCR鉴定PDCoV在HEK293细胞上的增殖情况，再用CRISPR/Cas9技术构建敲除hAPN基因的HEK293细胞系，通过CCK-8试验验证敲除细胞和野生型细胞的细胞活性；用RT-qPCR和Western blot检测hAPN敲除和过表达对PDCoV复制的影响；进一步通过同源建模和分子对接预测PDCoV S蛋白和hAPN蛋白的结合位点。结果显示： PDCoV在感染HEK293细胞后12~36 h快速增殖，在36 h达到顶峰，在HEK293细胞上至少可传至2代；hAPN敲除细胞与野生型细胞的细胞活性无明显差异，细胞敲除hAPN可显著抑制PDCoV复制，细胞过表达hAPN可促进PDCoV复制；同源建模和分子对接表明，S1蛋白可与hAPN蛋白结构域II结合，主要是S1蛋白的受体结合基序1(receptor binding motif 1，RBM1)氨基酸残基TYR92、THR51、THR48、PHE16和MET14通过氢键与hAPN蛋白的氨基酸残基PHE490、GLN531、ARG528和SER529结合。hAPN在PDCoV感染人源细胞中发挥重要作用，为深入研究PDCoV的细胞入侵和跨种传播机制提供了新的理论依据。

来源：2022年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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