畜牧兽医学报

作者：黄坚, 刘韵佳, 杨晓农, 李妍

单位：1. 西南民族大学畜牧兽医学院, 成都 610041;2. 西南民族大学教学动物医院, 成都 610041

关键词：猫疱疹病毒1型,RPA-Cas12a-LFD,核酸检测,应用

基金：西南民族大学中央高校基本科研业务费专项(2020NQN32)；西南民族大学引进人才科研启动金资助项目(RQD2021098)

猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1，FHV-1) 为水痘病毒属的双链DNA包膜病毒，是引起猫上呼吸道感染的主要病原之一。本研究以重组聚合酶扩增(RPA)、Cas12a反式酶切反应和侧流层析试纸条(LFD)显示技术为基础，旨在建立靶向FHV-1 TK基因的RPA-Cas12a-LFD快速可视化检测方法。根据FHV-1 TK基因的保守片段序列设计RPA引物和合成crRNA的引物，并通过反应体系验证、RPA-Cas12a-LFD检测灵敏度和特异性分析，以及临床样本的符合检测，评价FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法的有效性。结果显示，建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法可以特异性地检出FHV-1(与其他猫相关病原无交叉反应)，灵敏度极高(最低检测限为2.35×10-1 copies·μL-1)，检测时间短，结果可视化。该方法对20份表现明显症状的患猫呼吸道样本的FHV-1检出率(35%，7/20)高于现有的TB Green qPCR方法(25%，5/20)，对其中5份阳性样本的检测符合率为100%。综上表明，成功建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD检测方法的特异性好和敏感性极高，不需要特殊的检测设备，可以作为FHV-1现场快速检测的有效工具。

来源：2022年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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