畜牧兽医学报

作者：万颖, 周改静, 麻园, 石正旺, 肖书奇, 罗俊聪, 宋锐, 曹丽艳, 杨波, 王丽娟, 田宏, 郑海学

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 国家口蹄疫参考实验室, 兰州 730046;2. 西北农林科技大学动物医学院, 杨凌 712100

关键词：猪流行性腹泻病毒,N蛋白,抗体检测,阻断ELISA

基金：中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2020-LYRI)

旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV) N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原，通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件，建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法，并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样品进行检测，并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较。结果显示，建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL-1，血清最佳稀释比例为1∶1；酶标抗体的最佳工作浓度为1∶5 000；检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清，均无交叉反应；PEDV阳性血清的灵敏度为1∶16，与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1∶32)的敏感性相当；批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%，说明具有良好的重复性和稳定性；对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较，两者的kappa值为0.87，为高度一致。综上表明，本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测。

来源：2022年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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