畜牧兽医学报

作者：张文燕, 王亚文, 冯亚文, 滕召剑, 李潭清, 董炜, 刘涛, 宋勤叶, 任玉红

单位：1. 河北农业大学动物医学院&河北省兽医生物技术创新中心, 保定 071000;2. 河北省兽药监察所, 石家庄 050051;3. 顺平县动物疫病预防与控制中心, 保定 072250;4. 瑞普生物药业有限公司, 保定 071000

关键词：非洲猪瘟病毒,p72蛋白,截短p72蛋白,原核表达,抗原性

基金：河北省重点研发计划项目(21326613D)

比较非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)全长p72与截短p72蛋白(p72s)的抗原性，为ASFV特异性抗体检测技术研究提供试验依据。应用大肠杆菌表达系统表达p72和p72s蛋白，应用Western blot和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定表达的蛋白，分析蛋白的抗原表位；用纯化的重组全长和截短p72蛋白分别免疫小鼠，比较其免疫原性；通过ELISA和Western blot，评价重组p72和p72s蛋白与ASFV阳性血清的免疫反应性。结果：重组p72和p72s蛋白均以包涵体形式表达，相对分子质量分别约为76和42 ku，与预期大小相符；表达蛋白的酶解肽段对p72和p72s蛋白推测氨基酸序列的覆盖度分别为89.3%和88.39%，两者分别包含27和17个抗原表位；用p72与p72s蛋白免疫小鼠3次后，血清特异性抗体效价分别为1∶200~1∶25 600和1∶12 800~1∶409 600；基于重组p72与p72s蛋白的ELISA从108份猪血清中分别检出78份(72.2%)和85份(78.7%)阳性血清，两者的检测结果具有很好的一致性(kappa=0.826，P=0.016)；经Western blot检测的10份ASFV抗体阳性血清中有7份与p72蛋白反应，全部与p72s蛋白反应。截短p72蛋白比全长p72蛋白的抗原性好，更适合用于ASFV抗体检测。

来源：2022年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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