畜牧兽医学报

作者：王华健, 张宁, 杨威, 赵志强, 李茜, 陆安, 田勇, 何欣, 赵兴华, 李杰峰

单位：1. 河北农业大学动物医学院, 保定 071000;2. 河北省畜牧兽医研究所, 保定 071000;3. 石家庄市金元康牧药业有限公司, 石家庄 051130;4. 河北省兽医生物技术创新中心, 保定 071000

关键词：食源性致病菌,多重荧光定量PCR,检测方法,大肠杆菌O157∶H7,沙门菌,产单核细胞李氏杆菌

基金：农业基础性长期性科技工作动物疫病观测监测项目(ZX06S0303)

旨在建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157∶H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌的TaqMan多重荧光定量PCR (qPCR)方法。针对大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因、沙门菌invA基因和产单核细胞李氏杆菌hlyA基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针，建立多重qPCR反应体系，进行特异性、灵敏性和重复性试验，应用建立的方法检测生鲜食品中致病菌并与国家标准方法对比。结果显示：建立的多重qPCR方法特异性好，只扩增3种靶细菌；灵敏性最低检测值均为104 copies·μL-1；重复性良好，批内变异系数为0.09%～2.97%，批间变异系数为0.23%～7.82%；对120份生鲜肉样品进行检测对比，两种方法均检出2份大肠杆菌O157∶H7，21份产单核细胞李氏杆菌，多重qPCR方法检出14份沙门菌，比国标法多检出1份，建立的方法可检出所有受污染样品。综上表明，建立的多重qPCR检测方法能快速、准确检测食品中大肠杆菌O157∶H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌，为食品安全提供技术保障。

来源：2022年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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