畜牧兽医学报

作者：崔雨晨, 岳华, 汤承

单位：西南民族大学畜牧兽医学院, 成都 610041

关键词：纽布病毒,牛,RdRp基因,恒温隔绝PCR,现场检测

基金：西南民族大学新发动物疫病创新团队(2020 NTD02)；国家农业产业技术体系四川肉牛创新团队专项(SCCXTD-2020-13)

纽布病毒(nebovirus,NeV)是引起犊牛腹泻的新发病原，本试验旨在建立基于恒温隔绝式RT-PCR (insulated isothermal RT-PCR,iiRT-PCR)技术现场检测NeV的方法。根据NeV的RdRp基因的保守区域，设计并合成引物和探针，优化检测体系和检测试剂预混方法，建立检测NeV的iiRT-PCR方法。结果显示，成功建立了检测NeV的iiRT-PCR方法，该方法只特异性检出NeV，对牛冠状病毒、牛诺如病毒、A群牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛凸隆病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛瑞氏隐孢子虫和牛艾美尔球虫等无关病原不检出，批间变异系数为3.07%~3.12%，批内变异系数为2.45%~3.01%，检测下限为5.38 copies·μL-1。应用此方法对2020—2021年采集自红原县、若尔盖县、凉山彝族自治州西昌市和阆中市的101份犊牛腹泻样本进行检测，NeV的检出率为64.36%。本研究成功建立了检测NeV的iiRT-PCR方法，具有特异性强、稳定性好和灵敏度高的特点，检测试剂预混后配合使用PetNAD核酸萃取试剂盒，可实现NeV的现场检测，从核酸提取到报告检测结果仅需1 h，操作方便，为NeV的快速诊断提供了有力的工具。

来源：2022年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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