畜牧兽医学报

作者：唐林, 魏大为, 汪书哲, 雷召雄, 高晓茜, 王兴平, 马燕芬, 马云

单位：宁夏大学农学院 宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室, 银川 750021

关键词：南阳牛,ADIG基因,启动子,转录调控,双荧光素酶报告基因

基金：国家自然科学基金(32072720;31672403);宁夏回族自治区重点研发引才专项(2019YCZX0068);宁夏回族自治区科技创新团队计划项目(03010360052);现代农业产业技术体系建设项目(CARS-36)

旨在构建脂肪生成素基因(adipohenin,ADIG)在牛不同组织中的表达谱,鉴定其核心启动子区域及关键转录因子,以期阐明其转录调控的分子机制。本研究采集3头((24±2)月龄)健康南阳公牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮下脂肪组织,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组织中ADIG基因的相对表达量;克隆获得牛ADIG基因上游启动子区2 245 bp序列,构建6个pGL3-WT,与pRL-TK共转染293T细胞、原代脂肪细胞和3T3-L1细胞,进一步利用生物信息学预测其核心启动子区的关键转录因子。结果发现,ADIG基因在南阳牛肺(P<0.05)、肾(P<0.05)和皮下脂肪(P<0.05)组织中高表达;克隆得到2 245 bp及其6段缺失片段序列的ADIG基因的启动子序列,成功构建了pADIG-1 621/+59、pADIG-1 288/+59、pADIG-850/+59、pADIG-589/+59、pADIG-321/+59和pADIG-79/+59双荧光素酶报告载体,并检测到牛ADIG基因启动子核心区域在-321/-79;生物信息学初步预测牛ADIG基因核心区域含有C/EBPα、PPARδ、CREB、STAT5和AP-2α等转录因子结合位点。综上,牛ADIG基因在皮下脂肪组织中表达量最高,其启动子核心区位于-321/-79,C/EBPα、PPARδ、CREB、STAT5和AP-2α等转录因子对ADIG基因转录活性具有调控作用。本研究结果为探究ADIG基因在肉牛分子水平上的改良培育提供理论依据。

来源：2022年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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