畜牧兽医学报

作者：徐玲玉, 曹琛福, 李中圣, 陈俊宏, 柳腾飞, 王新凯, 贾伟新

单位：1. 华南农业大学兽医学院, 国家非洲猪瘟区域实验室(广州)/人兽共患病防控制剂国家地方 联合工程实验室/农业农村部人畜共患病重点实验室/农业农村部兽用疫苗创制重点实验室/广东省动物源性人兽共患病防控重点实验室, 广州 510642;2. 深圳海关动植物检验检疫技术中心, 深圳 518045;3. 岭南现代农业科学与技术广东省实验室, 广州 510642;4. 广东海大畜牧兽医研究院有限公司, 广州 511400

关键词：非洲猪瘟病毒,ASFV,阻断ELISA,p54蛋白,单克隆抗体

基金：广东省重点领域研发计划资助(2019B020211003);广东省科技计划项目(2021B1212030015);国家质量监督检验检疫总局科技项目(2016IK233);国家"863"高新技术项目(2012AA101301)作者简介:徐玲玉(1997-),女,四川成都人,硕士生,主要从事动物传染病研究

旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原,并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体,采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件,并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性和符合性评价。结果显示,抗原最佳包被浓度为2.0 μg·mL-1,抗原包被温度及时间为4℃过夜,被检血清稀释度为1:40,酶标单抗稀释度为1:1 000,被检血清作用时间为1 h,酶标单抗作用时间为30 min,底物作用时间为10 min。经阴、阳性样品检测和特异性、敏感性试验,当临界值阻断率≥ 55.2%时,判定为阳性,当阻断率<43.4%时,判定为阴性,介于两者之间判定为可疑。该方法与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、猪流感病毒、猪伪狂犬病病毒阳性血清不发生交叉反应,特异性好。批内重复试验及批间重复试验的变异系数(CV)均在10%以内。将该方法进行初步应用,并与商品化ELISA试剂盒进行符合性试验,两者的检测符合率为98%。综上表明,建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于ASFV临床样品的抗体检测。

来源：2022年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2022年第3期