畜牧兽医学报

作者：汪铭锐, 吴俊花, 王飞, 邵红霞, 钱琨, 叶建强, 秦爱建

单位：1. 扬州大学兽医学院 教育部禽类预防医学重点实验室, 扬州 225009;2. 扬州大学兽医学院 江苏省动物预防医学重点实验室, 扬州 225009;3. 扬州大学兽医学院 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009;4. 扬州大学 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室, 扬州 225009

关键词：鸡传染性贫血病毒,VP2蛋白,单克隆抗体,抗原表位

基金：国家重点研发计划（2016YFD0500803）

拟制备针对鸡传染性贫血病毒（CIAV）VP2蛋白的单克隆抗体（mAb），为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂。以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中，经IPTG诱导表达。以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳性杂交瘤细胞；采用截短表达CIAV VP2基因方法鉴定mAb识别的抗原表位。结果显示：成功获得了1株能稳定分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的杂交瘤细胞株，并命名为CIAV-VP2-4A12；亚类鉴定结果表明，该mAb重链为IgG1型，轻链为kappa链；Western blot结果显示，该mAb可以识别大肠杆菌，Sf9细胞和转染pCAGGS-VP2-Flag的DF1细胞中表达的VP2蛋白。使用原核表达截短蛋白进行表位鉴定，发现该mAb识别抗原表位序列是155KTVRW159，序列比对发现该表位在CIAV中高度保守。本研究成功制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性mAb，并精确鉴定了其识别表位，为VP2蛋白功能的研究以及CIAV的诊断方法研发提供了有效工具。

来源：2022年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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