畜牧兽医学报

作者：付强, 岳巧娴, 锡建中, 宋鹏琰, 陈晓勇, 周荣艳

单位：河北农业大学动物科技学院, 保定 071001

关键词：miR-127,FOXO4,绵羊颗粒细胞,细胞凋亡

基金：河北省自然科学基金（C2019204039）；河北农业大学精准畜牧学科群建设项目（1090064）

旨在研究oar-miR-127/FOXO4反馈环路及其对绵羊卵泡颗粒细胞的作用。本研究利用Promoter 2.0预测绵羊miR-127启动子，利用JASPAR数据库预测转录因子FOXO4与oar-miR-127启动子区的结合位点，构建包含预测结合位点的pGL3-basic-miR-127荧光素酶报告载体和pcDNA-FOXO4过表达载体；利用TargetScan软件在线预测oar-miR-127与FOXO4基因3'-UTR区结合位点，构建包含预测结合位点的pmir-GLO-FOXO4野生型、突变型和缺失型荧光素酶报告基因重组质粒；将pGL3-basic-miR-127荧光素酶报告载体和pcDNA-FOXO4过表达载体共（或单独）转染体外培养的绵羊卵泡颗粒细胞，FOXO4突变型、野生型和缺失型重组质粒与miR-127 mimic/mimic NC共转染体外培养的293T细胞，48 h后检测荧光素酶活性；pcDNA-FOXO4过表达载体（miR-127 mimic/mimic NC）转染绵羊卵泡颗粒细胞48 h，利用qRT-PCR检测miR-127（FOXO4）及凋亡基因（Casp3、Bax及BCL2）的表达水平。过表达转录因子FOXO4显著降低了oar-miR-127启动子相对荧光素酶活性（P0.05），但BCL2相对表达量显著降低（P<0.05）。本研究证实了oar-miR-127与靶基因FOXO4间存在反馈环路，并促进绵羊卵泡颗粒细胞的凋亡，为研究其在绵羊卵泡发育中的作用机制奠定了基础。

来源：2022年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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