畜牧兽医学报

作者：杨昌恒, 李琪, 黄维, 林亚秋, 王永, 向华, 朱江江

单位：1. 西南民族大学青藏高原研究院, 成都 610041;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室, 成都 610041

关键词：山羊,DGAT1,过表达,肌内前体脂肪细胞,甘油三酯

基金：国家自然科学基金（32072723）；四川省科技计划项目（2020JDJQ0010；2021YFYZ0003）；西南民族大学研究生创新型科研项目（CX2021SZ15）

旨在克隆山羊DGAT1基因序列，明确DGAT1基因在山羊不同组织中的表达模式，并进一步揭示过表达DGAT1基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳公羊（n=7）为试验动物。采用RT-PCR法克隆山羊DGAT1基因序列，并对序列进行生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR （real-time quantitative PCR，RT-qPCR）检测DGAT1在山羊不同组织中的相对表达水平；采用双酶切法构建pcDNA3.1-DGAT1真核表达载体并转染至山羊肌内前体脂肪细胞；使用RT-qPCR检测DGAT1过表达效率及脂质代谢相关基因的表达情况；通过油红O染色法观察过表达DGAT1对脂滴形成的影响，利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示，获得山羊DGAT1基因序列全长1 651 bp （GenBank登录号：MT221183），包含5'UTR 125 bp，CDS 1 470 bp，3'UTR 56 bp，编码489个氨基酸残基；山羊DGAT1基因在小肠中的表达量最高，在脾中表达量最低；RT-qPCR检测结果显示，DGAT1在细胞中过表达极显著（P<0.01），GPAM基因的相对表达水平显著上调（P<0.05），ADRP和ACOX1基因极显著上调（P<0.01），而AGPAT6基因相对表达水平显著下调（P<0.05），MLYCD和HSL基因极显著下调（P<0.01）；油红O染色结果显示，过表达DGAT1后脂滴聚积相较于对照组极显著增多（P<0.01），甘油三酯测定结果显示，过表达DGAT1基因可极显著增加山羊肌内脂肪细胞甘油三酯含量（P<0.01）。本研究成功获得山羊DGAT1基因CDS区序列并构建了pcDNA3.1-DGAT1真核表达载体，过表达DGAT1可显著促进山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积，并显著影响脂质代谢相关基因的表达，这些结果为进一步阐明DGAT1对调控山羊肌内脂肪代谢的作用机制提供了重要数据。

来源：2022年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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