畜牧兽医学报

作者：牛宏宇, 张瑞雪, 齐茂振, 马玉洁, 曲栓, 靳亚平, 林鹏飞

单位：西北农林科技大学动物医学院, 杨凌 712100

关键词：CREBZF,过表达载体,无缝克隆,山羊子宫内膜上皮细胞,凋亡

基金：国家自然科学基金面上项目（31772817）

旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型（长亚型SMILE和短亚型Zhangfei）基因的过表达载体，并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞（gEECs）凋亡的影响。本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物，分段进行PCR扩增；运用无缝克隆技术将所获得各目的基因片段与线性化pcDNA3.1（+）载体连接，构建pcDNA3.1（+）-SMILE和pcDNA3.1（+）-Zhangfei重组过表达载体，通过双酶切和测序进行鉴定；转染过表达载体至gEECs，提取总RNA和蛋白，通过qRT-PCR和Western blot验证过表达效率；应用流式细胞术检测过表达SMILE和Zhangfei对gEECs凋亡率的影响。PCR、双酶切显示各目的条带大小正确；测序显示目的片段与NCBI基因库中山羊CREBZF的预测序列一致性为100%；转染过表达载体后，gEECs中SMILE与Zhangfei在转录和翻译水平的表达量均显著增加，并发现SMILE可能在翻译后自身被修饰；空载体组细胞凋亡率为8.45%；转染pcDNA3.1（+）-SMILE组凋亡率显著上升至12.41%（P<0.01）；转染pcDNA3.1（+）-Zhangfei组凋亡率上升至9.83%，但相较于空载体组统计学差异不显著；结果提示，CREBZF可能调控gEECs的凋亡进程。本研究将目的基因分段克隆与无缝克隆技术联用，构建了上述2种过表达载体，为进一步探究CREBZF在反刍动物子宫内膜上皮细胞周期性变化中的作用奠定基础。

来源：2022年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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