畜牧兽医学报

作者：冯美莹, 卫恒习, 李莉, 张守全

单位：1. 肇庆学院生命科学学院, 肇庆 526061;2. 华南农业大学动物科学学院 国家生猪种业工程技术研究中心 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室, 广州 510642

关键词：lncRNA-Tubb4b,微管,Tubb4b,蛋白编码,小鼠

基金：广东省普通高校青年创新人才类项目（2018KQNCX293）；肇庆学院博士启动项目（221807）；肇庆学院实践教学改革研究项目（sjjx201910）

旨在探索长链非编码Tubb4b基因（lncRNA-Tubb4b）是否具有蛋白编码能力及其对Tubb4b基因的调控作用。本研究在lncRNA-Tubb4b中添加起始密码子ATG、0/1/2个的T尾和Flag标记，通过构建载体、脂质体转染和Western blot等技术对lncRNA-Tubb4b蛋白编码能力进行分析；随后，构建过表达载体和合成siRNA，通过脂质体转染和实时荧光定量PCR等技术检测lncRNA-Tubb4b对微管基因Tubb4b的影响。结果表明，我们扩增了添加0、1和2个T尾的Flag片段，其与lncRNA-Tubb4b融合后，成功构建到pcDNA3.1（-）载体中；转染小鼠精原细胞后发现，添加0、1和2个T尾的lncRNA-Tubb4b均没有FLAG蛋白条带；以pcDNA 3.1（-）-EGFP载体为对照，在小鼠精原细胞中过表达lncRNA-Tubb4b时，对照组细胞有荧光产生，试验组Tubb4b基因的mRNA表达水平极显著地降低（P<0.01）；在小鼠精原细胞中干扰lncRNA-Tubb4b表达后，极显著地提高Tubb4b基因的mRNA表达水平（P<0.01）。这表明，lncRNA-Tubb4b确实不编码蛋白质，过表达或干扰lncRNA-Tubb4b的表达会极显著地降低或升高Tubb4b基因的表达。

来源：2022年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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